一文了解獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)

近年來，獸藥在動(dòng)物性食品中殘留的問題日益嚴(yán)重，所以獸藥檢測(cè)也是食品中重要的檢測(cè)項(xiàng)目。但獸藥殘留檢測(cè)對(duì)技術(shù)要求高，既要求精細(xì)的微量操作手段，又需要高靈敏的痕量檢測(cè)技術(shù)。那么常見的獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)有哪些呢？

1、標(biāo)記免疫分析技術(shù)

常見標(biāo)記免疫分析技術(shù)及其應(yīng)用有哪些：

（1）放射免疫分析

放射免疫分析(Radioimmunoassay，RIA)是最早建立的標(biāo)記免疫檢測(cè)方法。1968年，Centeno等首次將RIA用于DDT和馬拉硫磷的檢測(cè)，其后該技術(shù)在對(duì)硫磷、克百威、百草枯、氯霉素、青霉素等農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)中得到了廣泛應(yīng)用。

（2）酶免疫分析

酶免疫分析(Enzyme immunoassay，EIA)是在抗原或抗體分子上標(biāo)記特定的酶，依據(jù)抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶催化顯色反應(yīng)的高效性對(duì)超微量殘留物進(jìn)行檢測(cè)。酶聯(lián)免疫吸附分析法(Enzyme．1inkedImmunosorbent Assay，ELISA)是目前最常用的酶免疫分析方法。ELISA法是一種非均相免疫測(cè)定方法，即抗原、抗體反應(yīng)在固液相間進(jìn)行，反應(yīng)平衡后需要進(jìn)行兩相分離，在實(shí)際應(yīng)用中檢測(cè)農(nóng)獸藥等小分子物質(zhì)常采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法和包被抗體(或抗原)直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法。迄今為止，已建立了有機(jī)磷、擬除蟲菊酯、三嗪類、磺胺類及氟喹諾酮類等農(nóng)獸藥的單殘留和多殘留ELISA檢測(cè)方法。

（3）熒光免疫分析

熒光免疫分析(Fluorescent immunoassay，F(xiàn)IA)的種類很多

例如，時(shí)間分辨熒光免疫分析(Time resolved fluoroimmunoassay，TRFIA)；

熒光偏振免疫分析(Fluorescence polarizafion Immunoassay，F(xiàn)PIA)；

熒光猝滅免疫分析(Fluorescence quenching immunoassay，F(xiàn)QIA)；

熒光增強(qiáng)免疫分析(Fluorescence enhancedimmunoassay，F(xiàn)EIA)等，它們以熒光物質(zhì)為標(biāo)記物，基于免疫反應(yīng)對(duì)待測(cè)物進(jìn)行檢測(cè)。在藥物殘留分析方面，TrFIA的研究目前僅局限于敵草隆、甲草胺、沙丁胺醇等少數(shù)農(nóng)獸藥。

（4）化學(xué)發(fā)光免疫分析

發(fā)光物質(zhì)主要有物理、化學(xué)和生物發(fā)光三類。在小分子藥物殘留檢測(cè)中，化學(xué)發(fā)光免疫分析(Chemiluminescence immunoassay，CLIA)的應(yīng)用最廣泛。CLIA以發(fā)光物質(zhì)或酶標(biāo)記抗原或抗體，標(biāo)記抗原和抗體與待測(cè)物反應(yīng)后經(jīng)分離、洗滌等步驟，加入氧化劑或酶底物而發(fā)光，通過測(cè)量最后的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定待測(cè)物的含量。目前國(guó)內(nèi)外已建立了甲基對(duì)硫磷、涕滅威、克百威、氯氰菊酯、氯霉素、鏈霉素、鹽酸克倫特羅等農(nóng)獸藥方法。

（5）膠體金標(biāo)記免疫分析

膠體金標(biāo)記免疫分析技術(shù)(Colloidal gold immunoassay，CGIA)采用納米金顆粒來標(biāo)記抗體，當(dāng)金標(biāo)抗體聚集到一定密度時(shí)，出現(xiàn)肉眼可以觀察紫紅色，實(shí)現(xiàn)對(duì)抗原和抗體反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行測(cè)定。實(shí)際應(yīng)用中一般通過制備抗農(nóng)藥或獸藥的單克隆抗體，將其做成膠體金免疫層析測(cè)試條，直接檢測(cè)樣品中的農(nóng)藥或獸藥殘留。

2、其他免疫分析技術(shù)

（1）以量子點(diǎn)為探針的免疫分析

導(dǎo)體量子點(diǎn)納米晶(semiconductor quantum dots nanocrystai)，簡(jiǎn)稱量子點(diǎn)(quantum dots,QDs)，特別是IIB-VIA族熒光量了點(diǎn)(如CdSe,CdTc)，在納米尺度時(shí)表現(xiàn)出許多獨(dú)特的光、電特性。在農(nóng)獸藥等小分子化合物殘留檢測(cè)方面的研究則剛起步。

（2）基于核酸適體的免疫分析

核酸適體(Aptamer)是一種功能類似抗體的新型仿生生物識(shí)別分子，它是利用指數(shù)富集配體系統(tǒng)進(jìn)化(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX)技術(shù)，從人工體外合成的隨機(jī)DNA／RNA文庫中篩出的一段單鏈寡核苷酸片段畔]，一般由25～80個(gè)堿基組成，它的出現(xiàn)對(duì)以抗體為關(guān)鍵試劑的免疫分析技術(shù)的發(fā)展具有重要意義。

3、單鏈抗體技術(shù)

單鏈抗體技術(shù)（scFv）是抗體分子中保留抗原結(jié)合部位的最小功能片段的一種新型重組蛋白，由重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)通過一段約15～25個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的彈性短肽(Linker)以非共價(jià)鍵相連而成，分子質(zhì)量約為完整抗體分子的1／6，具有單一抗原結(jié)合位點(diǎn)、分子質(zhì)量小、組織穿透力強(qiáng)、體內(nèi)清除快、免疫原性低、易于在大腸桿菌中表達(dá)和進(jìn)行基因進(jìn)化等特點(diǎn)。

4、蛋白芯片的應(yīng)用

蛋白芯片獸藥殘留檢測(cè)試劑盒集成了樣品前處理及樣品檢測(cè)過程，該項(xiàng)技術(shù)是二十一世紀(jì)發(fā)展起來的一種新的食品中獸藥殘留量檢測(cè)技術(shù)。目前，該試劑盒可以實(shí)現(xiàn)對(duì)豬肉、豬肝、雞肉、雞肝4種組織以及豬尿中恩諾沙星、磺胺二甲嘧啶、鏈霉素、克侖特羅的半定量檢測(cè)，除具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、樣品前處理簡(jiǎn)單，檢測(cè)方便快速等優(yōu)點(diǎn)外，還可實(shí)現(xiàn)對(duì)上述多種獸藥同時(shí)并行檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，極大地節(jié)省了檢測(cè)費(fèi)用，縮短了檢測(cè)時(shí)間，進(jìn)而提高了檢測(cè)效率。

5、穩(wěn)定性同位素分析

同位素稀釋質(zhì)譜法(IDMS)是通過同位素豐度的精確質(zhì)譜測(cè)量和所加入稀釋劑的準(zhǔn)確稱量，求得待測(cè)樣品中某元素的絕對(duì)量，從而有效地把元素的化學(xué)分析轉(zhuǎn)變?yōu)橥凰販y(cè)量。即在待測(cè)同位素樣品中，加入一定量含該元素另一同位素的稀釋劑使其均勻混合，達(dá)到同位素交換平衡后，測(cè)定相應(yīng)同位素豐度比值，即可定量測(cè)定待測(cè)同位素含量，因此，該方法具有同位素質(zhì)譜測(cè)量的高精度和化學(xué)計(jì)量的高準(zhǔn)確度。

6、液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)非常適合在食品檢測(cè)領(lǐng)域中開展對(duì)違禁藥物的檢測(cè)、有毒有害物質(zhì)的分析和多組分藥物殘留的分析等大量工作。尤其是對(duì)違禁藥物和生物毒素的檢測(cè)具有準(zhǔn)確、靈敏、檢出限低等優(yōu)點(diǎn)。

7、分子印跡技術(shù)

分子印跡聚合物(MolecularlyImprinted Polymers，MIPs)由于具有高度選擇性、專一識(shí)別性、高度穩(wěn)定性和使用壽命長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，在許多領(lǐng)域，如固相萃取、傳感器、色譜固定相、模擬抗體、模擬酶催化、膜分離等方面具有廣闊應(yīng)用前景。MIP理化性質(zhì)穩(wěn)定，具有耐酸堿、有機(jī)溶劑及環(huán)境因素的影響，又具有良好的分子識(shí)別能力，所以非常適合作為傳感器的識(shí)別元件。因此分子印跡技術(shù)使人們可以根據(jù)分析對(duì)象進(jìn)行分子設(shè)計(jì)，制備出相應(yīng)的分子識(shí)別元件，提高傳感器對(duì)被分析物的選擇性。

8、SPR-生物傳感器

生物傳感器是用生物活性材料（酶、蛋白質(zhì)、DNA、抗體、抗原、生物膜等）與物理化學(xué)換能器有機(jī)結(jié)合的分析儀器，是一種較先進(jìn)的檢測(cè)與監(jiān)控方法，也是物質(zhì)分子水平的快速和微量分析方法。在獸藥殘留分析中，SPR-生物傳感器大部分應(yīng)用在牛奶中抗微生物藥物殘留分析的研究上，例如檢測(cè)磺胺二甲嘧啶、恩氟沙星、鏈霉素和異阿凡曼菌素